Conservation des ARN / RNA preservation

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J’ai entendu dire qu’il valait mieux conserver les echantillons dans RNAlater au -20 ou -80°C pour eviter la degradation de l’ARN plutot qu’à température ambiante. Quelle est la meilleure technique ?

2 Responses to “Conservation des ARN / RNA preservation”

  1. Meriadeg Meriadeg dit :

    Effectivement, après une semaine il est recommandé de conserver les échantillons ARN dans un tampon conservateur et à basse température.

    Voici un protocole de préparation du tampon et quelques recommandations:

    Préparation d’une solution type RNAlater (AMBION, 6528641), pour Préservation d’ARN et ADN

    Cet exemple est une manière de préparer du RNAlater.

    réactifs:
    0,5 M EDTA disodique dihydraté (18,61 g/100 ml, à pH 8,0 avec NaOH en agitant)
    1M de sel de citrate de sodium trisodique dihydraté (29,4 g/100 ml; bien remuer pour dissoudre)
    sulfate d’ammonium (sel)
    eau Milli-Q (ou BioPak).

    Dans un bécher, mélanger:
    40 ml de 0,5 M EDTA,
    25 ml de citrate de sodium 1M,
    700 g de sulfate d’ammonium
    935 ml d’eau Milli-Q,

    Agiter sur une plaque chauffante
    agitateur doux jusqu’à ce que le sulfate d’ammonium soit complètement dissous. Laisser refroidir, ajuster le pH de la solution à pH 5,2 (20°C) en utilisant 1M H2SO 4.

    Transferer dans une bouteille à bouchon vissé et de stocker à température ambiante ou réfrigérée.
    Température ambiante: conservation garantie 6 mois
    Si cristallisation du RNAlater : chauffer à 37 ° C et agiter pour dissoudre.
    l’ inactivation des RNase est réversible, ne pas rincer le RNAlater des échantillons avant de les utiliser.

    Lignes directrices pour l’utilisation de solution RNAlater
    • Utilisez RNAlater avec des tissus frais seulement, ne pas congeler les tissus avant l’immersion dans le RNAlater.
    • Avant l’immersion dans RNAlater solution, couper de grands échantillons de tissus à ≤ 0,5 cm dans une seule dimension.
    • Placez le tissu frais dans 5-10 volumes de RNAlater.
    • La plupart des échantillons placés dans RNAlater solution peuvent-être conservés à température ambiante pendant 1 semaine sans compromettre la qualité de l’ARN, ou à -20 ° C ou -80 ° C indéfiniment.
    • Ne pas congeler les échantillons en solution RNAlater immédiatement, stocker à 4 ° C pendant la nuit (afin de permettre une bonne pénétration dans les tissus), retirez éventuellement le surnageant, puis passer à -20 ° C ou -80 ° C pour le stockage à long terme.

    La plupart des échantillons peuvent être conservés à 25 ° C en RNAlater pour un maximum de 1 semaine sans perte significative de qualité de l’ARN. Après 2 semaines à 25 ° C, l’ARN semble généralement légèrement dégradé (la plus-part du temps acceptable pour des analyses en Northern, mais d’une qualité suffisante pour la protection contre les nucléases ou analyse en RT-PCR).

    infos en anglais sur:
    http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/4954.html

  2. Meriadeg Meriadeg dit :

    Des précisions, notamment sur la quantité de sulfate (de 200g/l à saturation).

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